穿刺操作全程在超聲實時引導下進行，嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范，并采用全身麻醉聯(lián)合鎮(zhèn)痛方案。術中通過超聲實時定位，避開肝臟大血管、膽管及腎門血管等高危結構，有效減少穿刺相關出血及組織損傷，保障術后動物狀態(tài)快速恢復。

1.1 穿刺前動物的準備

操作前動物必須進行健康評估和凝血檢測，排除凝血功能障礙。穿刺前動物至少禁食8小時。麻醉方案：舒泰50和右美托咪定（多咪靜）麻醉劑量為0.02 mL/kg；抽取適量麻醉劑用生理鹽水稀釋至10倍體積靜脈注射。麻醉過程中注意動物呼吸及心率狀況。穿刺前用藥：阿托品注射液0.05 mL/kg肌注，酚磺乙胺（止血敏）0.1 mL/kg肌注。  

1.2 肝臟穿刺

麻醉后動物左側臥保定，暴露右側肋間及腹部，剃除被毛，交替使用酒精和碘伏棉球?qū)μ瓿幻珔^(qū)域進行消毒。助手手持B超探頭，探頭mark點朝向操作者。將探頭橫向沿著第9-11肋間放置或肋下腹部，看到清晰的肝臟影像后，尋找合適的穿刺視野。選用16G的一次性活檢穿刺針進行穿刺，術者一邊觀察屏幕內(nèi)穿刺針影像一邊進針，期間注意穿刺針進針深度，確定穿刺針取材槽全部進入肝臟組織內(nèi)后，推動穿刺針栓進行取材。取材后緩慢拔出穿刺針。用無菌紗布按壓穿刺點5-10分鐘進行止血，B超觀察確定無出血后放開紗布。

穿刺部位應選取肝右葉外周實質(zhì)區(qū)域，避開肝門大血管及膽囊；優(yōu)先取肝邊緣完整，無淤血和壞死區(qū)域的肝組織，單批次獲取足量完整肝小葉組織。肝臟穿刺活檢創(chuàng)傷小、出血風險低，可重復多次穿刺，支持長周期動態(tài)隨訪。

圖1：肝臟穿刺活檢超聲示意圖

1.3 腎臟穿刺

動物右側臥保定，暴露左側肋間及腹部，剃除被毛。統(tǒng)一選取單側腎臟下極外側皮質(zhì)區(qū)，避開腎門、腎盂及大血管，將探頭橫向放置肋弓邊緣位置，看到清晰的腎臟影像后，沿著B超屏幕上顯示的腎臟下極位置大約10~30°角度進行穿刺取材。穿刺時針尖的斜面應背對腎下段的弧形面，朝向動物的尾側，以避免出現(xiàn)滑脫現(xiàn)象。穿刺完成后用無菌紗布按壓穿刺點5-10分鐘進行止血，確定無繼續(xù)出血后放開紗布，并用腎托局部加壓固定40分鐘。

猴腎臟穿刺取樣需精準獲取腎皮質(zhì)組織，完整保留腎小球、腎小管結構，杜絕髓質(zhì)、脂肪雜組織污染。腎臟穿刺操作可控性強，術后恢復快，適合慢性實驗長期監(jiān)測。

圖2：腎臟穿刺軌跡示意圖

1.4 動物術后護理

操作結束后使用復合麻醉劑半量的鹽酸阿替美唑注射液（咹啶醒）肌肉注射，逆轉右美托咪定的鎮(zhèn)靜作用，加速動物麻醉轉醒。術后用藥：痛立定注射液0.1 mL/kg止痛抗炎，氨芐西林鈉50 mg/kg消炎。

動物轉醒期間密切觀察動物狀態(tài)，待動物基本恢復自主運動后放回籠內(nèi)。術后4小時后恢復自由飲食。24小時之內(nèi)需對動物進行多次密切觀察。

• 組織形態(tài)與結構研究：HE染色用于基礎病理診斷，特殊染色（如PAS、Masson、網(wǎng)狀纖維、剛果紅等）用于特定基質(zhì)或異常沉積物觀察；

  
  

• 蛋白原位表達研究：免疫組化（IHC）和免疫熒光（IF）用于組織切片上目標蛋白的定位、半定量及多蛋白共表達分析；

  
  

• 基因原位變異研究：熒光原位雜交（FISH）和顯色原位雜交（CISH）用于組織原位檢測基因擴增、融合、染色體易位；

  
  

• 核酸水平靶向研究：提取組織核酸后，采用熒光定量PCR檢測突變、基因表達或病原體載量；

  
  

• 高通量組學研究：提取核酸或蛋白后，開展全外顯子/靶向Panel基因組測序、轉錄組測序，以及基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學分析，用于分子分型、機制探索及生物標志物發(fā)現(xiàn)。